HEPES作為IVT反應(yīng)buffer的相關(guān)研究
更新時(shí)間：2023-09-12 點(diǎn)擊次數(shù)：1146次
mRNA原液中采用HEPES作為buffer可能與前一步RNA聚合酶體外轉(zhuǎn)錄密切相關(guān)。
早在1987年便有研究報(bào)道使用HEPES緩沖對(duì)用于體外轉(zhuǎn)錄，在該研究中考察了不同反應(yīng)條件下IHNV（感染性造血壞死病毒）的 RNA 聚合酶的體外轉(zhuǎn)錄，研究結(jié)果表明對(duì)比Tris，使用HEPES緩沖液可以最大限度地提高體外轉(zhuǎn)錄（IVT）效率。
研究中對(duì)緩沖條件的研究表明，HEPES緩沖液刺激的RNA合成量比Tris緩沖液高三倍（圖1 a），最佳濃度的HEPES緩沖液為400mM。
英國帝國理工大學(xué)醫(yī)學(xué)院傳染病系系主任Robin Shattock是mRNA預(yù)防性疫苗領(lǐng)域的專家，與BioNTech以及PNI等公司都有較為密切的合作。其團(tuán)隊(duì)2021年發(fā)表關(guān)于saRNA體外轉(zhuǎn)錄體系優(yōu)化的文章中，考察篩選了影響saRNA體外轉(zhuǎn)錄的關(guān)鍵影響因素，最終確定了采用40mM濃度的HEPES作為IVT反應(yīng)體系buffer，具有更優(yōu)的體外轉(zhuǎn)錄效果。
2016年BioNTech發(fā)表LPX-mRNA制劑的文章中mRNA原液中所采用的buffer為HEPES。該研究中使用HEPES緩沖液配置1mg/ml的RNA原液，用于進(jìn)一步制備RNA-LPX。
HEPES作為IVT反應(yīng)體系buffer具有優(yōu)勢，這是我們結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)，推斷BioNTech采用HEPES緩沖對(duì)作為mRNA原液buffer的原因。
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